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一個內(nèi)行人需要了解的細(xì)胞爬片知識

發(fā)布日期: 2019-10-26
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  細(xì)胞爬片又名爬片,就是讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi),細(xì)胞在玻片上生長,主要用于組織學(xué),免疫組織hua學(xué),冰凍切片,細(xì)胞涂片,原位雜交等,細(xì)胞爬片是根據(jù)實驗研究的需要,使貼壁細(xì)胞在一定的固相表面(如蓋玻片、載玻片)上貼壁生長而獲得的一種體外細(xì)胞實驗材料。
 

細(xì)胞爬片

  我們在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時,免不了要制備細(xì)胞爬片,爬片質(zhì)量*決定了后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的性。
  在醫(yī)學(xué)生物研究中,免疫熒光檢測等需用到細(xì)胞爬片?,F(xiàn)有的細(xì)胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫熒光檢測時,為了節(jié)約抗體,需免疫組化筆在爬片上進(jìn)行范圍的圈定,將抗體加入劃定區(qū)域,免疫組化筆中的疏水成分阻滯抗體溢出所圈定的范圍,從而達(dá)到節(jié)約抗體的目的。
  但在實際使用過程中,會有大量免疫組化筆的成分混入目標(biāo)范圍內(nèi),且線條粗大,造成樣品數(shù)量減少,同時混入目標(biāo)范圍內(nèi)的免疫組化筆的成分容易造成背景噪聲及雜質(zhì)影響免疫熒光的結(jié)果,嚴(yán)重影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確。
  爬片的準(zhǔn)備:
  1、爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片;
  2、應(yīng)用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;
  3、將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再用三蒸水沖洗3遍(個人認(rèn)為主要目的是沖洗干凈就可以了),放在飯盒或者培養(yǎng)皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
  培養(yǎng)板的準(zhǔn)備:
  1、泡酸過夜
  2、沖洗,烘干(1、2步驟與前大致相同)
  3、放入超凈工作臺用紫外線照1~2小時就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入,若細(xì)胞貼壁能力不強(qiáng),可經(jīng)多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強(qiáng)的話,就可以省略了,進(jìn)行紫外線消毒)
  注:此步自己的經(jīng)驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi),緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的:浸過PBS的爬片依靠表面的液體,可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密,以利于細(xì)胞長到爬片上。
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